2 × Taq Plus PCR Mix

Ultra-reng, héich-Effizienz an High-Fidelity Taq DNA Polymerase.

Taq Plus DNA Polymerase ass eng Mëschung aus Taq an Pfu DNA Polymerase. Et huet 5'-3 'Exonuclease Aktivitéit an 3'-5' Exonuclease Aktivitéit, mat de Charakteristike vun enger héijer Verstäerkungseffizienz an engem nidderegen Mismatchrate. Am Verglach mat Taq DNA Polymerase huet Taq Plus DNA Polymerase d'Virdeeler vun enger verstäerkter Verstäerkungslängt (einfach Schabloune kënnen effektiv bis zu 20kb verstäerkt ginn a komplex Schabloune kënne bis zu 10 kb sinn), gutt Fidelitéit, etc. Am Verglach mat Pfu DNA Polymerase, et huet d'Virdeeler vu séierer Verstärkungsgeschwindegkeet an héijer Reaktiounseffizienz.

Kat. Nee Verpakungsgréisst
4992791 1ml
4992792 5*1 ml Eng
4992793 5 × 1 ml

Produkt Detail

Experimentell Beispill

FAQ

Produkt Tags

Aktivitéit Definitioun

1 Eenheet (U) Taq Plus DNA Polymerase Aktivitéit ass definéiert als d'Quantitéit vum Enzym, dee gebraucht gëtt fir 10 nmol Deoxynucleotiden an sauer onléislech Substanzen bei 74 ° C bannent 30 Minutten mat aktivéierter Saumonsperm DNA als Schabloun/Primer opzehuelen.

Qualitéitskontroll

D'Puritéit duerch SDS-PAGE Detektioun ass méi wéi 99%; Keng Aktivitéit vum exogene Nuklease gëtt festgestallt; Single-Copy Gen am mënschleche Genom kéint effektiv verstäerkt ginn; Keng bedeitend Aktivitéitsännerung wa se bei Raumtemperatur fir eng Woch gelagert gëtt.

Main Technesch Parameteren

Taq Plus DNA Polymerase huet 5'-3 'Exonuclease Aktivitéit an 3'-5' Exonuclease Aktivitéit. PCR Produkter kënnen direkt an den TA Vektor gekloont ginn. Wann d'Klooneffizienz verbessert muss ginn, ass et recommandéiert d'PCR Produkter als éischt ze purifizéieren an A-Tailing auszeféieren ier se an den TA Vektor klonen.

One-Tube Taq Plus PCR Mix (National High-Tech Produkt Zertifizéierung)

■ Den Taq Plus PCR Mix huet d'Spezifizitéit an d'Sensibilitéit vun der PCR Reaktioun verbessert a kann komplex Template mat héije GC Inhalt, sekundär Struktur an dergläiche verstäerken. Sou niddereg wéi 2 Exemplare vun der Zilschabloun kënne verstäerkt ginn, fir méi genau experimentell Resultater ze garantéieren.

■ Déi eenzegaarteg Taq Plus PCR Mix Formel mécht de ganze Reaktiounssystem ganz stabil, an d'Aktivitéit gëtt net beaflosst vu widderholl Gefriess-Thaw oder laangfristeg Lagerung bei 4 ° C.

■ Déi stabil an effizient virbereet PCR Mëschungsléisung kann d'Operatioun séier an einfach maachen, immens d'Aarbechtsintensitéit reduzéieren an de Samplingfehler. High-Performance PCR Enhancer an Optimizer sinn och am Mix abegraff, wat d'Ufuerderunge fir PCR Bedéngungen reduzéiert.

■ Dëst Produkt huet béid faarweg a hallefaarweg Systemer. Dye-enthale PCR Mix Produkter kënnen direkt nom PCR elektrophoreséiert ginn, ouni Probe Puffer derbäi ze ginn.

Uwendungen

Et gëtt allgemeng benotzt fir d'Verstäerkung vu Templates mat héijer Fidelitéit a komplexer Struktur, sou wéi héije GC Inhalt a Secondaire Struktur. An de meeschte Fäll kann et Taq DNA Polymerase ersetzen.

All d'Produkter kënne fir ODM/OEM personaliséiert ginn. Fir Detailer,klickt w.e.g. Customized Service (ODM/OEM)


  • Virdrun:
  • Nächst:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Experimental Example Benotzt genomesch DNA als Schabloun fir 1 kb Fragment ze verstäerken.
    No der PCR Reaktioun, huelt 5 μl fir Elektrophorese Detektioun.
    Q: Keng Verstärkungsbands

    A-1 Schabloun

    ■ D'Schabloun enthält Proteinverunreinigungen oder Taq Inhibitoren, asw .——Purifizéiert d'DNA Schabloun, läscht Protein Gëftstoffer oder extrahéiert Schabloun DNA mat Reinigungskits.

    ■ D'Denaturéierung vun der Schabloun ass net komplett ——Appropriately Erhéijung Denaturatiounstemperatur a verlängeren Denaturatiounszäit.

    ■ Degradatioun vun der Schabloun —— Virbereet d'Schabloun nei.

    A-2 Primer

    ■ Schlechter Qualitéit vu Primer ——Synthetiséiert de Primer.

    ■ Primer Degradatioun ——Aliquot déi héich Konzentratioun Primer a klenge Volumen fir Erhaalung. Vermeit multiple Gefrierung an Ofdreiwung oder laangfristeg 4 ° C Kryopreservéiert.

    ■ Onkorrekt Design vu Primer (zB Primerlängt net genuch, Dimer geformt tëscht Primer, etc.) -Resign Primer (vermeit d'Bildung vu Primer Dimer a Sekundärstruktur)

    A-3 mg Eng2+Konzentratioun

    ■ Mg2+ Konzentratioun ass ze niddereg ——Properly Erhéijung Mg2+ Konzentratioun: Optimiséiert de Mg2+ Konzentratioun duerch eng Serie vu Reaktiounen vun 1 mm bis 3 mm mat engem Intervall vun 0,5 mm fir den optimale Mg ze bestëmmen2+ Konzentratioun fir all Schabloun a Primer.

    A-4 Annealing Temperatur

    ■ Déi héich Glühungstemperatur beaflosst d'Bindung vum Primer a Schabloun. ——Reduzéiert d'Anneidungstemperatur an optiméiert den Zoustand mat engem Gradient vun 2 ° C.

    A-5 Verlängerung Zäit

    ■ Kuerz Verlängerungszäit —— Vergréissert Verlängerungszäit.

    Q: Falsch positiv

    Phänomener: Negativ Proben weisen och d'Zilsequenzbands.

    A-1 Kontaminatioun vum PCR

    ■ Kräizkontaminatioun vun der Zilsequenz oder Verstäerkungsprodukter ——Virsiichteg net d'Probe mat der Zilsequenz an den negativen Probe ze pipetten oder se aus dem Zentrifugrohr erauszespillen. D'Reagenz oder d'Ausrüstung solle autoklave ginn fir existent Nukleinsäuren ze eliminéieren, an d'Existenz vu Kontaminatioun sollt duerch negativ Kontrollexperimenter bestëmmt ginn.

    ■ Reagens Kontaminatioun ——Aliquot d'Reagenz a späichere bei niddregen Temperaturen.

    A-2 Premierr

    ■ Mg2+ Konzentratioun ass ze niddereg ——Properly Erhéijung Mg2+ Konzentratioun: Optimiséiert de Mg2+ Konzentratioun duerch eng Serie vu Reaktiounen vun 1 mm bis 3 mm mat engem Intervall vun 0,5 mm fir den optimale Mg ze bestëmmen2+ Konzentratioun fir all Schabloun a Primer.

    ■ Falsch Primer Design, an d'Zilsequenz huet Homologie mat der Net-Zil Sequenz. ——Re-Design Primer.

    Q: Net-spezifesch Verstäerkung

    Phänomener: D'PCR Verstäerkungsbänner sinn inkonsistent mat der erwaarter Gréisst, entweder grouss oder kleng, oder heiansdo komme béid spezifesch Verstäerkungsbänner an net spezifesch Verstäerkungsbänner op.

    A-1 Primer

    ■ Schlecht Primer Spezifizitéit

    ——Re-Design Primer.

    ■ D'Primer Konzentratioun ass ze héich ——Erhéijung vun der Denaturatiounstemperatur korrekt an d'Denaturatiounszäit verlängeren.

    A-2 Eng2+ Konzentratioun

    ■ Den Mg2+ d'Konzentratioun ass ze héich ——Reduktioun vun der Mg2+ Konzentratioun richteg: Optimiséieren vum Mg2+ Konzentratioun duerch eng Serie vu Reaktiounen vun 1 mm bis 3 mm mat engem Intervall vun 0,5 mm fir den optimale Mg ze bestëmmen2+ Konzentratioun fir all Schabloun a Primer.

    A-3 Thermostabil Polymerase

    ■ Iwwerdriwwe Enzymbetrag ——Reduzéieren Enzymmengen entspriechend mat Intervallen vun 0,5 U.

    A-4 Annealing Temperatur

    ■ D'Annealingtemperatur ass ze niddereg ——Appropriately erhéicht d'Annehlungstemperatur oder adoptéiert déi Zwee-Stuf Annealmethod

    A-5 PCR Zyklen

    ■ Ze vill PCR Zyklen ——Reduzéieren d'Zuel vun de PCR Zyklen.

    Q: Patchy oder verschmiert Bands

    A-1 Primer——Schlecht Spezifizitéit ——Re-design de Primer, ännert d'Positioun an d'Längt vum Primer fir seng Spezifizitéit ze verbesseren; oder genéiert PCR ausféieren.

    A-2 Schabloun DNA

    ——D’Schabloun ass net reng —— Purifizéiert d'Schabloun oder extrahéiert DNA mat Reinigungskits.

    A-3 mg Eng2+ Konzentratioun

    ——Mg2+ d'Konzentratioun ass ze héich - - Mg korrekt reduzéieren2+ Konzentratioun: Optimiséiert de Mg2+ Konzentratioun duerch eng Serie vu Reaktiounen vun 1 mm bis 3 mm mat engem Intervall vun 0,5 mm fir den optimale Mg ze bestëmmen2+ Konzentratioun fir all Schabloun a Primer.

    A-4 dNTP

    —— D'Konzentratioun vun dNTPs sinn ze héich ——Reduzéieren d'Konzentratioun vun dNTP entspriechend

    A-5 Annealing Temperatur

    ——Zevill niddereg Glühwärmtemperatur —— Passend d'Erhéijungstemperatur erhéijen

    A-6 Zyklen

    ——Zevill Zyklen ——Optiméiert d'Zyklusnummer

    Q: Wéi vill Template DNA soll an engem 50 μl PCR Reaktiounssystem derbäigesat ginn?
    ytry
    Q: Wéi verstäerkt ech laang Fragmenter?

    Den éischte Schrëtt ass déi entspriechend Polymerase ze wielen. Regelméisseg Taq Polymerase kann net Korrektur liesen wéinst Mangel u 3'-5 'Exonuclease Aktivitéit, a Mëssverständnis wäert d'Extensiounseffizienz vu Fragmenter staark reduzéieren. Dofir kann reegelméisseg Taq Polymerase net effektiv Zilfragmenter méi grouss wéi 5 kb amplifizéieren. Taq Polymerase mat spezieller Modifikatioun oder aner High Fidelity Polymerase sollt ausgewielt ginn fir d'Extensiounseffizienz ze verbesseren an d'Bedierfnesser vun der laanger Fragmentamplifikatioun gerecht ze ginn. Zousätzlech erfuerdert d'Amplifikatioun vu laange Fragmenter och eng entspriechend Upassung vum Primer Design, Denaturatiounszäit, Verlängerungszäit, Puffer pH, etc. Normalerweis kënnen Primer mat 18-24 bp zu bessere Rendement féieren. Fir Schabloun Schued ze vermeiden, soll d'Denaturatiounszäit bei 94 ° C op 30 Sekonnen oder manner pro Zyklus reduzéiert ginn, an d'Zäit fir d'Temperatur op 94 ° C eropzesetzen ier d'Verstäerkung sollt manner wéi 1 min sinn. Ausserdeem kann d'Verlängerungstemperatur op ongeféier 68 ° C astellen an d'Verlängerung Zäit no dem Taux vun 1 kb/min designen eng effektiv Verstäerkung vu laange Fragmenter garantéieren.

    Q: Wéi kann ech d'Verstäerkungsvertrauen vum PCR verbesseren?

    De Feelerquote vun der PCR Verstäerkung ka reduzéiert ginn andeems verschidde DNA Polymerasen mat héijer Fidelitéit benotzt ginn. Ënnert all den Taq DNA Polymerasen, déi bis elo fonnt goufen, huet Pfu Enzym déi niddregst Feelerquote an déi héchste Vertrauen (kuckt ugeschloss Tabelle). Zousätzlech zu der Enzymauswiel kënnen d'Fuerscher de PCR Mutatiounsquote weider reduzéieren andeems d'Reaktiounsbedéngungen optimiséiert ginn, abegraff d'Optimiséierung vun der Puffersammlung, d'Konzentratioun vun der thermostabiler Polymerase an d'Optimiséierung vum PCR Zyklusnummer.

    Schreift Äre Message hei a schéckt eis se