2 × Taq PCR Mix

Ultra-reng an effizient Taq DNA Polymerase.

Taq DNA Polymerase ass e rekombinant Protein mat engem Molekulargewiicht vun 94 kDa, dat induzéiert an ausgedréckt gouf aus Escherichia coli gekloont mat Thermo aquatica DNA Polymerase Gen, an dann gereinegt a getrennt duerch dräi Schrëtt vun der Kolonnreinigung. Den Enzym huet gutt Stabilitéit a staark Spezifizitéit, ouni exogene Nuklease a bakteriell DNA Verschmotzung, an ass gëeegent fir routinell PCR Verstäerkung.

One-Tube Taq MasterMix (National High-Tech Produkt Zertifizéierung)

■ Den Taq MasterMix huet d'Spezifizitéit an d'Sensibilitéit vun der PCR Reaktioun verbessert a kann komplex Template mat héije GC Inhalt, sekundär Struktur an dergläiche verstäerken. Sou niddereg wéi 2 Exemplare vun der Zilschabloun kënne verstäerkt ginn, fir méi genau experimentell Resultater ze garantéieren.

■ Déi eenzegaarteg Taq MasterMix Formel mécht de ganze Reaktiounssystem ganz stabil, an d'Aktivitéit gëtt net beaflosst vu widderholl Gefriess-Thaw oder laangfristeg Lagerung bei 4 ° C.

■ Déi stabil an effizient virbereet PCR gemëschte Léisung kann d'Operatioun séier an einfach maachen, immens d'Aarbechtsintensitéit reduzéieren an de Samplingfehler. High-Performance PCR Enhancer an Optimizer sinn och am Mix abegraff, wat d'Ufuerderunge fir PCR Bedéngungen reduzéiert.

■ Dëst Produkt huet béid faarweg a hallefaarweg Systemer. Faarffaarweg MasterMix Produkter kënnen direkt nom PCR elektrophoreséiert ginn, ouni Puffer ze lueden.

Kat. Nee Verpakungsgréisst
4992229 1ml
4992230 5*1 ml Eng
4992255 1 ml
4992256 5 × 1 ml

Produkt Detail

Experimentell Beispill

FAQ

Produkt Tags

Aktivitéit Definitioun

D'Aktivitéit vun 1 Eenheet (U) Taq DNA Polymerase ass definéiert als d'Quantitéit vum Enzym, dee gebraucht gëtt fir 10 nmol Deoxynucleotiden an sauer onléislech Substanzen bei 74 ℃ bannent 30 Minutten mat aktivéierter Saumonsperm DNA als Schabloun/Primer opzehuelen.

Qualitéitskontroll

D'Puritéit duerch SDS-PAGE Detektioun ass méi wéi 99%; Keng Aktivitéit vum exogene Nuklease gëtt festgestallt; Single-Copy Gen am mënschleche Genom kéint effektiv verstäerkt ginn; Keng bedeitend Aktivitéitsännerung wa se bei Raumtemperatur fir eng Woch gelagert gëtt.

Main Technesch Parameteren

Den Enzym huet 5'-3 'Polymerase Aktivitéit a 5'-3' Exonuclease Aktivitéit, an ouni 3'-5 'Exonuclease Aktivitéit. D'Verlängerungsgeschwindegkeet vun der DNA Polymeriséierung ass 1-2 kb/min bei 70-75 ℃. De PCR Produkt huet 3'-dA Iwwerhang, déi direkt am TA-Klonenvektor gekloont kënne ginn.

Uwendungen

Et gëtt allgemeng benotzt fir Verstäerkung, Primerverlängerung, Sequencing, an A-Tailing um stompegen Enn vun DNA dat ass <6 kb an huet niddereg Vertrauensfuerderunge.

All d'Produkter kënne fir ODM/OEM personaliséiert ginn. Fir Detailer,klickt w.e.g. Customized Service (ODM/OEM)


  • Virdrun:
  • Nächst:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Benotzt mënschlecht genomescht DNA als Schabloun fir 1 kb Fragment ze verstäerken
    Experimental Example No der PCR Reaktioun, huelt 5 μl fir Elektrophorese Detektioun.
    Q: Keng Verstärkungsbands

    A-1 Schabloun

    ■ D'Schabloun enthält Proteinverunreinigungen oder Taq Inhibitoren, asw .——Purifizéiert d'DNA Schabloun, läscht Protein Gëftstoffer oder extrahéiert Schabloun DNA mat Reinigungskits.

    ■ D'Denaturéierung vun der Schabloun ass net komplett ——Appropriately Erhéijung Denaturatiounstemperatur a verlängeren Denaturatiounszäit.

    ■ Degradatioun vun der Schabloun —— Virbereet d'Schabloun nei.

    A-2 Primer

    ■ Schlechter Qualitéit vu Primer ——Synthetiséiert de Primer.

    ■ Primer Degradatioun ——Aliquot déi héich Konzentratioun Primer a klenge Volumen fir Erhaalung. Vermeit multiple Gefrierung an Ofdreiwung oder laangfristeg 4 ° C Kryopreservéiert.

    ■ Onkorrekt Design vu Primer (zB Primerlängt net genuch, Dimer geformt tëscht Primer, etc.) -Resign Primer (vermeit d'Bildung vu Primer Dimer a Sekundärstruktur)

    A-3 mg Eng2+Konzentratioun

    ■ Mg2+ Konzentratioun ass ze niddereg ——Properly Erhéijung Mg2+ Konzentratioun: Optimiséiert de Mg2+ Konzentratioun duerch eng Serie vu Reaktiounen vun 1 mm bis 3 mm mat engem Intervall vun 0,5 mm fir den optimale Mg ze bestëmmen2+ Konzentratioun fir all Schabloun a Primer.

    A-4 Annealing Temperatur

    ■ Déi héich Glühungstemperatur beaflosst d'Bindung vum Primer a Schabloun. ——Reduzéiert d'Anneidungstemperatur an optiméiert den Zoustand mat engem Gradient vun 2 ° C.

    A-5 Verlängerung Zäit

    ■ Kuerz Verlängerungszäit —— Vergréissert Verlängerungszäit.

    Q: Falsch positiv

    Phänomener: Negativ Proben weisen och d'Zilsequenzbands.

    A-1 Kontaminatioun vum PCR

    ■ Kräizkontaminatioun vun der Zilsequenz oder Verstäerkungsprodukter ——Virsiichteg net d'Probe mat der Zilsequenz an den negativen Probe ze pipetten oder se aus dem Zentrifugrohr erauszespillen. D'Reagenz oder d'Ausrüstung solle autoklave ginn fir existent Nukleinsäuren ze eliminéieren, an d'Existenz vu Kontaminatioun sollt duerch negativ Kontrollexperimenter bestëmmt ginn.

    ■ Reagens Kontaminatioun ——Aliquot d'Reagenz a späichere bei niddregen Temperaturen.

    A-2 Premierr

    ■ Mg2+ Konzentratioun ass ze niddereg ——Properly Erhéijung Mg2+ Konzentratioun: Optimiséiert de Mg2+ Konzentratioun duerch eng Serie vu Reaktiounen vun 1 mm bis 3 mm mat engem Intervall vun 0,5 mm fir den optimale Mg ze bestëmmen2+ Konzentratioun fir all Schabloun a Primer.

    ■ Falsch Primer Design, an d'Zilsequenz huet Homologie mat der Net-Zil Sequenz. ——Re-Design Primer.

    Q: Net-spezifesch Verstäerkung

    Phänomener: D'PCR Verstäerkungsbänner sinn inkonsistent mat der erwaarter Gréisst, entweder grouss oder kleng, oder heiansdo komme béid spezifesch Verstäerkungsbänner an net spezifesch Verstäerkungsbänner op.

    A-1 Primer

    ■ Schlecht Primer Spezifizitéit

    ——Re-Design Primer.

    ■ D'Primer Konzentratioun ass ze héich ——Erhéijung vun der Denaturatiounstemperatur korrekt an d'Denaturatiounszäit verlängeren.

    A-2 Eng2+ Konzentratioun

    ■ Den Mg2+ d'Konzentratioun ass ze héich ——Reduktioun vun der Mg2+ Konzentratioun richteg: Optimiséieren vum Mg2+ Konzentratioun duerch eng Serie vu Reaktiounen vun 1 mm bis 3 mm mat engem Intervall vun 0,5 mm fir den optimale Mg ze bestëmmen2+ Konzentratioun fir all Schabloun a Primer.

    A-3 Thermostabil Polymerase

    ■ Iwwerdriwwe Enzymbetrag ——Reduzéieren Enzymmengen entspriechend mat Intervallen vun 0,5 U.

    A-4 Annealing Temperatur

    ■ D'Annealingtemperatur ass ze niddereg ——Appropriately erhéicht d'Annehlungstemperatur oder adoptéiert déi Zwee-Stuf Annealmethod

    A-5 PCR Zyklen

    ■ Ze vill PCR Zyklen ——Reduzéieren d'Zuel vun de PCR Zyklen.

    Q: Patchy oder verschmiert Bands

    A-1 Primer——Schlecht Spezifizitéit ——Re-design de Primer, ännert d'Positioun an d'Längt vum Primer fir seng Spezifizitéit ze verbesseren; oder genéiert PCR ausféieren.

    A-2 Schabloun DNA

    ——D’Schabloun ass net reng —— Purifizéiert d'Schabloun oder extrahéiert DNA mat Reinigungskits.

    A-3 mg Eng2+ Konzentratioun

    ——Mg2+ d'Konzentratioun ass ze héich - - Mg korrekt reduzéieren2+ Konzentratioun: Optimiséiert de Mg2+ Konzentratioun duerch eng Serie vu Reaktiounen vun 1 mm bis 3 mm mat engem Intervall vun 0,5 mm fir den optimale Mg ze bestëmmen2+ Konzentratioun fir all Schabloun a Primer.

    A-4 dNTP

    —— D'Konzentratioun vun dNTPs sinn ze héich ——Reduzéieren d'Konzentratioun vun dNTP entspriechend

    A-5 Annealing Temperatur

    ——Zevill niddereg Glühwärmtemperatur —— Passend d'Erhéijungstemperatur erhéijen

    A-6 Zyklen

    ——Zevill Zyklen ——Optiméiert d'Zyklusnummer

    Q: Wéi vill Template DNA soll an engem 50 μl PCR Reaktiounssystem derbäigesat ginn?
    ytry
    Q: Wéi verstäerkt ech laang Fragmenter?

    Den éischte Schrëtt ass déi entspriechend Polymerase ze wielen. Regelméisseg Taq Polymerase kann net Korrektur liesen wéinst Mangel u 3'-5 'Exonuclease Aktivitéit, a Mëssverständnis wäert d'Extensiounseffizienz vu Fragmenter staark reduzéieren. Dofir kann reegelméisseg Taq Polymerase net effektiv Zilfragmenter méi grouss wéi 5 kb amplifizéieren. Taq Polymerase mat spezieller Modifikatioun oder aner High Fidelity Polymerase sollt ausgewielt ginn fir d'Extensiounseffizienz ze verbesseren an d'Bedierfnesser vun der laanger Fragmentamplifikatioun gerecht ze ginn. Zousätzlech erfuerdert d'Amplifikatioun vu laange Fragmenter och eng entspriechend Upassung vum Primer Design, Denaturatiounszäit, Verlängerungszäit, Puffer pH, etc. Normalerweis kënnen Primer mat 18-24 bp zu bessere Rendement féieren. Fir Schabloun Schued ze vermeiden, soll d'Denaturatiounszäit bei 94 ° C op 30 Sekonnen oder manner pro Zyklus reduzéiert ginn, an d'Zäit fir d'Temperatur op 94 ° C eropzesetzen ier d'Verstäerkung sollt manner wéi 1 min sinn. Ausserdeem kann d'Verlängerungstemperatur op ongeféier 68 ° C astellen an d'Verlängerung Zäit no dem Taux vun 1 kb/min designen eng effektiv Verstäerkung vu laange Fragmenter garantéieren.

    Q: Wéi kann ech d'Verstäerkungsvertrauen vum PCR verbesseren?

    De Feelerquote vun der PCR Verstäerkung ka reduzéiert ginn andeems verschidde DNA Polymerasen mat héijer Fidelitéit benotzt ginn. Ënnert all den Taq DNA Polymerasen, déi bis elo fonnt goufen, huet Pfu Enzym déi niddregst Feelerquote an déi héchste Vertrauen (kuckt ugeschloss Tabelle). Zousätzlech zu der Enzymauswiel kënnen d'Fuerscher de PCR Mutatiounsquote weider reduzéieren andeems d'Reaktiounsbedéngungen optimiséiert ginn, abegraff d'Optimiséierung vun der Puffersammlung, d'Konzentratioun vun der thermostabiler Polymerase an d'Optimiséierung vum PCR Zyklusnummer.

    Schreift Äre Message hei a schéckt eis se